Pourquoi l’ELISPOT?

Figure 1

Figure 1: Sensibilité remarquable de la technique d’ELISPOT en ce qui concerne la détection de cellules produisant des cytokines et présentes à des fréquences réduites. Un nombre défini de cellules produisant de l’interféron γ a été mélangé avec un million de cellules présentatrices de l’antigène (APC). Cette figure montre le nombre de cellules produisant de l’interféron γ mesuré par ELISPOT (panneau supérieur), le marquage intracytoplasmique (panneau du milieu) ainsi que les résultats de mesure par ELISA (panneau inférieur).



Les avantages de l’ELISPOT applique aux cytokines sont les suivants:

  • Une mesure précise de la fréquence jusqu’à une cellule par million. Cette résolution est supérieure de plusieurs ordres de grandeurs à celle que l’on obtient et la technique de mesure de cytokine intracellulaire ou le marquage par des tétramères ou encore par des mesures d’ELISA (voir Figure 1). Une telle sensibilité est cruciale dans la mesure ou les cellules T spécifiques de l’antigène sont généralement présentes in vivo à des fréquences très faibles.
  • Une analyse des cellules T à haut débit devient possible. Une équipe de laborantins bien entraînés peut tester des centaines d’échantillons pour leur réactivité vis à vis de dizaines d’antigènes.
  • Moins de cellules sont nécessaires en comparaison avec d’autres techniques cellulaires. Par exemple, 45 ml de sang suffit afin de tester la réactivité via à vis de 600 antigènes ou peptides différents.
  • Les déterminants reconnus par les cellules T CD4+ et CD8+ peuvent être identifiés. Dans la mesure ou la technique d’ELISPOT requiert peu de cellules et permet un haut débit, elle est idéale pour le screening de collections de peptides et la cartographie de déterminants.
  • L’avidité fonctionnelle de cellules T spécifiques d’un antigène peut être déterminée. Ceci est reflété par 50% de la dose maximum de peptides pour obtenir une stimulation.
  • Le processus de sécrétion de cellules non-traitées de manière pharmacologique peut être étudié. Si une baisse nette de la production est observée, on peut déterminer si le nombre de cellules sécrétrices a diminué ou si les cellules sécrètent en quantité inférieure.
  • Les lymphocytes survivent aux tests de cytokines. Ceci permet de propager des populations cellulaires après le test afin de les analyser plus avant, de les cloner ou de les congeler.
  • Les cellules humaines congelées peuvent être testées sans perte de fonction. Les échantillons obtenus pré-traitement ou post-traitement peuvent être ainsi testées côte à côte et les résultats peuvent être reproduits.