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Muss ich sterile Platten verwenden?
Typische ELISPOT-Assays sind mit maximal 1-2 Tagen Zellkultur
verbunden. Antibiotika im Kulturmedium reichen gewöhnlich aus, um
Infektionen zu vermeiden. Dennoch empfiehlt es sich, sterile Platten zu
verwenden.
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Andere Fragen-Kapitel:
 Scannen und Analyse
ELISPOT-Analyzer
Durchführung des Assays
Bildqualität
GLP-Konformität
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Welche Möglichkeiten habe ich, wenn meine Zellzahlen
sehr gering sind?
Um optimale Ergebnisse zu erreichen, müssen T-Zellen und
Antigen präsentierende Zellen auf der Membran einen Monolayer
bilden. Sind die T-Zellen der limitierende Faktor (beispielsweise wenn
die zu testenden Zellen aus einem soliden Organ oder aus
Biopsiematerial gewonnen werden), so kann jede beliebige Zahl von
T-Zellen auf einem Monolayer aus Antigen präsentierenden Zellen
plattiert werden. Sind beide Arten von Zellen nur begrenzt vorhanden,
empfiehlt CTL die Verwendung der niedrigvolumigen Platten, die von
Whatman hergestellt werden. Alternativ kann die Aktivierungskultur in
normalen Platten mit rundem oder konischem Boden durchgeführt und
die Zellen anschließend auf eine ELISPOT-Platte
überführt werden. (Pipettieren Sie sehr vorsichtig, um die
Scherkräfte während der Überführung zu minimieren.)
Wir können Ihnen helfen, den Assay an Ihre Wünsche
anzupassen. Bitte kontaktieren Sie die Wissenschaftler bei CTL unter ctl-e@immunospot.com.
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Welche Membrantypen empfiehlt CTL?
Im Allgemeinen werden PVDF-Platten empfohlen. Die fraktale
Oberfläche und die hydrophoben Eigenschaften der PVDF-Membranen
sind ideal für die Bindung der meisten Coating-Antikörper und
Substrate. Um unser Informations-Blatt zu den Plattentypen zu erhalten,
wenden Sie sich bitte an ctl-e@immunospot.com.
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Kann ich auch durchsichtige Platten in den
ImmunoSpot®-Analyzern verwenden?
Ja, ImmunoSpot®-Analyzer können auch durchsichtige Platten
auswerten. Im Allgemeinen empfiehlt CTL jedoch undurchsichtige Platten,
da diese kein Licht leiten und dadurch Spiegelungen, die die
Bildanalyse beeinträchtigen, vermeiden.
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Momentan verwende ich Agarose-Platten. Können diese auch
analysiert werden?
ImmunoSpot®-Analyzer in der Lage, ELISPOTs mit Agarose-Overlay zu
untersuchen. Allerdings neigen Punkte auf Agarose-Platten dazu, sehr
rasch zu verblassen, und die Lichtspiegelungen auf der Agarose machen
die Untersuchung arbeitsintensiver.
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Kann ich ImmunoSpot®-Systeme verwenden, um durchsichtige
Platten mit „goldenen“ Punkten (Punkte, die durch
Gold-Silber-Färbung entwickelt wurden) zu untersuchen?
ImmunoSpot®-Analyzer können auch diese Platten problemlos
auswerten.
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Wie lange kann ich verpackte sterile ELISPOT-Platten
aufbewahren?
Ungecoatete, steril verpackte und unversehrte PVDF-Platten sind mehrere
Jahre lang haltbar.
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Wie lange kann ich gecoatete, feuchte Platten aufbewahren?
Gecoatete, feuchte Platten sind etwa eine Woche lang stabil, wenn sie
bei 4°C aufbewahrt werden. Sie können getrocknet und noch
länger aufbewahrt werden, aber die Stabilität verschiedener
Antikörper unterscheidet sich erheblich.
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Können die entwickelten Platten autoklaviert und wieder
verwendet werden?
Nein. Allerdings können die unbenutzten Wells einer nur teilweise
für einen Assay verwendeten Platte noch verwendet werden. (Setzen
Sie Antibiotika ein. Diese gewähren ausreichende Sterilität
für einen ein- bis zweitägigen Assay.)
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ELISPOT-Platten